摘要：按照GMP 要求，制定清潔分析方法驗(yàn)證方案，通過(guò)對(duì)化學(xué)殘留物檢測(cè)分析方法驗(yàn)證，確認(rèn)可適用于清潔驗(yàn)證的分析方法。關(guān)鍵詞：GMP 化學(xué)殘留物清潔分析方法驗(yàn)證
在制藥工業(yè)生產(chǎn)中，一條生產(chǎn)線往往能生產(chǎn)幾個(gè)產(chǎn)品或原料藥，
因此現(xiàn)版GMP 要求在藥品生產(chǎn)過(guò)程中必須對(duì)生產(chǎn)設(shè)備進(jìn)行有效的清潔，以防止本產(chǎn)品對(duì)后續(xù)生產(chǎn)的產(chǎn)品造成化學(xué)物質(zhì)或微生物的污染，倍值在工作曲線上對(duì)應(yīng)的待測(cè)物濃度即為估算的檢出限。
2.1.2非儀器分析中的方法：
用已知濃度的被測(cè)物，試驗(yàn)出其能被可靠地檢測(cè)出的最低濃度或量。
從而而影響了后續(xù)產(chǎn)品的質(zhì)量和安全性。為了能有效的檢測(cè)出設(shè)備中的化學(xué)殘留物，應(yīng)使用經(jīng)驗(yàn)證的、檢出靈敏度高的檢驗(yàn)方法來(lái)檢測(cè)污染物，即進(jìn)行清潔分析方法驗(yàn)證。
通常清潔分析方法驗(yàn)證包括：取樣方法驗(yàn)證和檢驗(yàn)方法驗(yàn)證。
一、取樣方法驗(yàn)證包括
1.棉簽取樣方法驗(yàn)證
取樣過(guò)程需要驗(yàn)證，通過(guò)回收率實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證取樣過(guò)程的回收率和重現(xiàn)性，通常取樣回收率和檢驗(yàn)方法回收率結(jié)合進(jìn)行，總回收率一般不低于70%，RSD不大于20%。
驗(yàn)證方法如下：
1.1準(zhǔn)備一塊與設(shè)備表面相同的材質(zhì)。1.2在鋼板上劃出10*10CM的區(qū)域。
1.3將20倍限度量的待檢測(cè)物溶液，定量裝入經(jīng)校驗(yàn)注射器。1.4其溶液均勻涂抹在10*10CM的區(qū)域內(nèi)。1.5自然干燥或電吹風(fēng)溫和干燥。
1.6用選定的擦拭溶劑潤(rùn)濕棉簽左右或上下前進(jìn)式進(jìn)行擦拭。1.7將擦拭棉簽放入棉簽管中，加入預(yù)定溶劑5ml，超聲萃取。1.8用經(jīng)驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法，計(jì)算回收率和回收率的RSD。
2.淋洗的取樣方法根據(jù)管路設(shè)計(jì)，選擇淋洗線路下游或最低點(diǎn)的幾個(gè)取樣口，分別按照微生物取樣和化學(xué)取樣規(guī)程在最后一步淋洗近結(jié)束時(shí)取樣。淋洗法樣品可對(duì)沖洗液直接檢測(cè)也可以對(duì)沖洗液稀釋后檢測(cè)，無(wú)論是直接檢測(cè)還是稀釋后檢測(cè)都應(yīng)在接到樣品后先將樣品同空白溶劑做視覺(jué)檢查，確定是否有顏色差異和異物存在。如果有上述現(xiàn)象發(fā)生，直接判為不合格。
通常淋洗液方法不做回收率驗(yàn)證，定量檢查做回收率驗(yàn)證，可以用淋洗溶劑沖洗已知量的分析物回收率，回收率通常不低于95%。
二、清潔檢驗(yàn)分析方法驗(yàn)證
用于清潔驗(yàn)證的分析方法，其驗(yàn)證的原理和一般的方法驗(yàn)證相同。清潔驗(yàn)證中的分析對(duì)象是殘留物，驗(yàn)證中所用的分析方法一般與雜質(zhì)的定量實(shí)驗(yàn)相仿，要求就專屬性、檢測(cè)限、定量限、線性和范圍、精密度、準(zhǔn)確度進(jìn)行驗(yàn)證。
1.專屬性
專屬性要求同條件下用空白溶劑、空白棉簽溶液、空白棉簽加待分析殘留物樣品溶液，待分析殘留物樣品溶液各進(jìn)樣證明本方法不存在干擾，或者干擾可用適當(dāng)?shù)姆椒ㄏ簟?/p>
2.檢測(cè)限（LOD ）和定量限（LOQ ）
在常規(guī)的原料藥分析中，LOD值和LOQ 值一般并不重要，因?yàn)楸粶y(cè)物的量一般要遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于LOQ。但在清潔驗(yàn)證中就不同了，因?yàn)槠浞治龅哪康木褪且_定痕量的殘留物，所以這兩個(gè)值是清潔驗(yàn)證中非常關(guān)心的。
2.1檢測(cè)限（LOD ）
傳統(tǒng)的方法是信噪比法，通常LOD 是指信噪比為3:1時(shí)的被分析物濃度。其驗(yàn)證方法如下：
2.1.1儀器分析中的方法：
方法一：把已知低濃度供試品溶液和空白溶液分別重復(fù)測(cè)定六次，計(jì)算測(cè)得信號(hào)的平均值與信噪比，以信噪比為3：1時(shí)的相應(yīng)濃度或注入儀器的量定為檢出限。
方法二：平行測(cè)量空白六次，計(jì)算背景響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差，其3
248中國(guó)化工貿(mào)易China Chemical Trade 2.2定量限（LOQ ）
LOQ 是指信噪比為10:1時(shí)的被分析物濃度.LOQ是符合一定的精密度和線性要求的最低濃度。其驗(yàn)證方法如下：
2.2.1儀器分析中的方法：
方法一：把已知低濃度供試品溶液分別重復(fù)測(cè)定六次，計(jì)算測(cè)得信號(hào)的平均值與信噪比，以信噪比為10：1時(shí)的相應(yīng)濃度或注入儀器的量定為檢出限。
方法二：平行測(cè)量空白六次，計(jì)算背景響應(yīng)值得標(biāo)準(zhǔn)偏差，其10倍值在工作曲線上對(duì)應(yīng)的待測(cè)物濃度即為估算的定量限。
2.2.2非儀器分析中的方法：
用已知濃度的被測(cè)物，試驗(yàn)出其能以較好的準(zhǔn)確度和精密度檢測(cè)出的最低濃度或量。
3.線性/范圍3.1線性
線性系指在設(shè)計(jì)范圍內(nèi)，測(cè)定結(jié)果與試樣中被測(cè)物濃度呈正比關(guān)系的程度。測(cè)量方法簡(jiǎn)述：在規(guī)定的范圍內(nèi)，以系列樣品測(cè)得的結(jié)果和被測(cè)物濃度進(jìn)行函數(shù)作圖，再用最小二乘法進(jìn)行線性回歸。必要時(shí)，測(cè)試結(jié)果可經(jīng)數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換，再進(jìn)行線性回歸計(jì)算，應(yīng)列出回歸方程、線性相關(guān)系數(shù)。線性的相關(guān)系數(shù)應(yīng)不低于0.99，濃度范圍應(yīng)達(dá)到殘留物限度的50%~150%。
3.2范圍
范圍系指能達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性，測(cè)試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。測(cè)量方法簡(jiǎn)述：通過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證來(lái)證明不論被測(cè)物濃度是在接近檢測(cè)范圍邊緣還是在檢測(cè)范圍內(nèi)，都能被準(zhǔn)確、精密和線性良好地檢測(cè)的濃度范圍。定量檢查應(yīng)至少測(cè)試5個(gè)濃度的范圍并且包含清潔的最低限和最高限度。
4.精密度
精密度系指在規(guī)定的條件下，從同一個(gè)均勻樣品中，經(jīng)過(guò)多次取樣測(cè)定所得結(jié)果之間的接近程度。通常用相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD ）來(lái)表示。定量檢查的RSD 應(yīng)不得大于10%。
淋洗法和棉簽法用于限度檢查通常不需要做精密度實(shí)驗(yàn)。5.準(zhǔn)確度
準(zhǔn)確度系指用該方法所獲得的檢驗(yàn)結(jié)果與真實(shí)值之間的接近程度，表征了每種分析方法的正確性，一般以回收率（％）表示。對(duì)于設(shè)備清潔分析方法驗(yàn)證，取清潔驗(yàn)證方案中確定的棉簽法限度標(biāo)準(zhǔn)中的最低限度值（L 值）為依據(jù)，以20倍的L 值作為100%濃度標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)，分別配制120%，2.5%濃度溶液，平行制備及測(cè)定這三種溶液六次，計(jì)算回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，即得。
三、結(jié)語(yǔ)
取樣方法的驗(yàn)證，實(shí)際是對(duì)取樣人員的操作方法及清洗干凈設(shè)備殘留物轉(zhuǎn)移和溶出過(guò)程的全面考察。清潔分析方法驗(yàn)證是證明采用的方法適合于相應(yīng)的檢測(cè)要求，是保證分析結(jié)果真實(shí)可靠的前提條件。從而遵循GMP 要求，有效的防止了交差污染。