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【兆恒機(jī)械】基因分析儀十大常見問題

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  • 添加日期:2022年08月12日

毛細(xì)管電泳(CE)基因分析儀平臺,你知道有哪些嗎?

1987年,賽默飛Applied Biosystems在Sanger測序原理的基礎(chǔ)上發(fā)布第一代真正商業(yè)化的自動(dòng)測序儀。

1996年,推出310型全自動(dòng)遺傳分析儀,實(shí)現(xiàn)全部操作自動(dòng)化,包括自動(dòng)灌膠、自動(dòng)進(jìn)樣、自動(dòng)數(shù)據(jù)收集分析等。也標(biāo)志著從平板膠進(jìn)入毛細(xì)管電泳時(shí)代。

隨后,伴隨著儀器的更新,通量逐漸提高,出現(xiàn)我們常見的3130系列、3730系列以及經(jīng)典的3500系列。其中3500Dx和3500xl Dx基因分析儀已獲得NMPA認(rèn)證。

站在巨人的肩膀上,2017年,推出最簡便、自動(dòng)化程度最高的一款基因分析儀,它就是SeqStudio。

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02

基因分析儀的兩大功能,您了解嗎?

經(jīng)過數(shù)十年結(jié)果的驗(yàn)證,Sanger測序是DNA測序的金標(biāo)準(zhǔn),此外,多重片段分析也是您廣泛應(yīng)用的遺傳分析技術(shù)。

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03

Sanger 測序的工作流程有哪些,您了解嗎?

Sanger測序的工作流程從樣本制備到最終數(shù)據(jù)分析,包括PCR擴(kuò)增、PCR產(chǎn)物純化、循環(huán)測序、測序反應(yīng)純化、毛細(xì)管電泳和數(shù)據(jù)分析。如圖,賽默飛提供Sanger測序全套解決方案。

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04

BigDye測序試劑盒,V1.1、V3.1、Direct,您get 了嗎?

測序試劑盒可以根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)需求進(jìn)行選擇,可參考如下的表格:

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* Recommended: ++

* Satisfactory: +

* Not recommended: -

05

Sanger測序流程中,循環(huán)測序反應(yīng)時(shí)PCR產(chǎn)物的用量究竟要加多少?

不同長度的PCR片段對產(chǎn)物的需求量不一樣,一般可參考如下列表:

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06

POP-4、POP-6、POP-7膠,傻傻分不清楚?

POP4聚合物可實(shí)現(xiàn)快速反應(yīng),更適合于人類身份鑒定和片段分析。POP6聚合物是進(jìn)行長片段測序的理想選擇。當(dāng)和BigDye V1.1一起使用時(shí),POP-6也可以用于測定非常靠近5’端的堿基。POP-7聚合物介于POP-4和POP-6之間,他非常的靈活,適用于很多的應(yīng)用。


07

片段分析,通過分離熒光標(biāo)記的片段并檢測其相對大小,熒光標(biāo)記怎么設(shè)計(jì)?

一種是在引物5’端標(biāo)記熒光基團(tuán),另一種是用熒光標(biāo)記ddNTP。


5’端引物標(biāo)記通常用于微衛(wèi)星序列分析;熒光標(biāo)記ddNTP通常用于SNaPshot多重分析。

08

片段分析數(shù)據(jù)信號強(qiáng)度的范圍是多少?

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09

片段分析實(shí)驗(yàn)常用的熒光染料組合有哪些?分別包含哪些熒光染料?


片段分析實(shí)驗(yàn)常用的熒光染料組合為G5和E5。

G5染料組合包括6-FAM、VIC、NED、PET和LIZ,通常用于微衛(wèi)星序列分析。

E5染料組合包括dR110、dR6G、dTAMRA、dROX和LIZ,主要用于SNaPshot 重分析。


10

基因分析儀上的數(shù)據(jù),選擇什么軟件分析?

· 測序數(shù)據(jù).ab1文件建議用Sequence Analysis軟件進(jìn)行分析;

· 片段分析數(shù)據(jù).fsa文件建議用GeneMapper軟件進(jìn)行分析;

· 人類鑒定數(shù)據(jù).hid文件建議用GeneMapper ID-X軟件進(jìn)行分析