全自動生化分析儀試劑存在的問題及解決辦法： 1 優(yōu)質(zhì)的儀器用水 優(yōu)質(zhì)的儀器用水是使用好檢驗(yàn)試劑的一個十分重要的環(huán)節(jié)之一。因?yàn)闇y定離子類項目：比如銅、鐵、鋅、鈣、鎂、磷。 這些項目在使用過程中，儀器用水的質(zhì)量相當(dāng)重要，雖然現(xiàn)在一般醫(yī)院的生化儀都有制水系統(tǒng)，但制水系統(tǒng)基本都是制備去離子水，離子交換樹脂在使用一段時間后交換能力明顯下降，需要定期進(jìn)行更換，否則制備的水離子含量多，電導(dǎo)率偏高。使用含離子超標(biāo)的水沖洗儀器，直接影響檢驗(yàn)結(jié)果。再如血氨、二氧化碳項目，如果水質(zhì)不好，儀器用水中本身含氨和二氧化碳就很高，則檢驗(yàn)該項目的結(jié)果也會受到嚴(yán)重的影響。還有如果血清中含有GLDH（谷氨酸脫氫酶）,而儀器使用水存在氨時，可消耗NADH，使利用NADH的酶聯(lián)連續(xù)檢測法結(jié)果偏高。解決辦法：定期檢測水質(zhì)，當(dāng)儀器用水的電阻小于1.0MQ時需要更換離子交換樹脂或活性炭。 2 標(biāo)本的及時分離及測定 標(biāo)本的及時分離和測定是用好檢驗(yàn)試劑的首要環(huán)節(jié)，因?yàn)榉彩抢?/span>NADH轉(zhuǎn)化為NAD變化率來檢測其物質(zhì)含量的試驗(yàn)都或多或少受到血液存放時間的影響，原因是全血放時間越長紅細(xì)胞利用血清中的糖進(jìn)行無氧酵解產(chǎn)生的丙酮酸，丙酮酸使NADH轉(zhuǎn)化為NAD，這樣使用測定結(jié)果假性升高。解決辦法：a、作好與臨床的溝通。對抽血人員和標(biāo)本運(yùn)送人員進(jìn)行培訓(xùn);b、及時分離血清并及時檢測；c、也可將全自動生化分析儀上的延遲時間設(shè)置大于60秒，這樣試劑在延遲期內(nèi)消除丙酮酸的干擾，可安全避免假陽性結(jié)果出現(xiàn)。 3 交叉污染 3.1生化分析儀本身的清洗問題造成的交叉污染使用 全自動生化分析儀時，儀器的交叉污染現(xiàn)象是引起實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏離的一個原因。由于全自動生化分析儀試劑針需要解除各種試劑，一般難以徹底清洗干凈，所以容易造成分析項目的攜帶污染。而生化項目的測定往往需要僅幾微升樣本，試劑往往需要幾百微升 ，尤其在沒有自動清洗程序的流動池式生化分析儀上，由于前帶現(xiàn)象的存在，如果前一個人標(biāo)本為高值樣本，則接后的第一個低值標(biāo)本結(jié)果應(yīng)慎重報告。不僅沒有沖洗程序的生化儀器上有這種現(xiàn)象，就是具有自動清洗程序的全自動生化分析儀也有交叉污染，例如Beckman 全自動生化分析儀CX4，它的試劑針(probe)、樣品吸樣針及反應(yīng)攪拌棒是利用高壓沖洗洗液沖洗，然后用高壓壓縮空氣吹干，有時由于洗液壓力和壓縮空氣壓力偏低，使試劑吸針、樣品針及反應(yīng)攪拌棒沖洗不干凈、吹不干，從而導(dǎo)致反應(yīng)池之間相互污染、試劑間交叉污染，是檢驗(yàn)結(jié)果偏離。另一個值得注意的問題是許多生化儀器由于長期頻繁的利用，使加樣針和試劑針的注射器磨損加重或注射器的“特氟龍”吸頭不及時更換，使吸樣針或試劑針密封層增大，產(chǎn)生泄露現(xiàn)象也是造成樣本間及實(shí)際間項目污染的一個重要原因。試劑吸樣和樣品吸樣不準(zhǔn)確，通常導(dǎo)致利用速率法測試的標(biāo)本系統(tǒng)偏低或偏高。眾所周知，速率法計算因子是由加樣體積和試劑體積參與確定的，如果加樣體積或加試劑體積不準(zhǔn)，導(dǎo)致真正速率法計算因子和理論計算因子偏離，從而使測試結(jié)果不準(zhǔn)確。 解決辦法：a、定期進(jìn)行一期維護(hù)和保養(yǎng)；b、按要求及時更換零部件；c；定期對儀器進(jìn)行校準(zhǔn)；d;全自動生化分析標(biāo)本和試劑用量少，殘存少量即會影響測試結(jié)果，每天應(yīng)用無水乙醇擦洗并定期更換干燥棒，保證比色杯清洗后不留賤液，避免比色杯的交叉污染。 3.2 檢驗(yàn)項目間的交叉污染 在全自動生化分析儀使用中，我們發(fā)現(xiàn)一個項目會影響緊隨其后項目的測試結(jié)果，造成這種影響的原因之一是一種實(shí)際中含有另一試驗(yàn)的測定物質(zhì)而直接干擾其測試結(jié)果。比如：在TP試劑中含有大量的CUSO4,如果將Cu放在TP項目的后面檢測，會使檢測結(jié)果偏高或重復(fù)性差。再如P放在含有磷酸鹽的項目后面，TBA放在含有膽酸鹽的項目后面都會使檢測結(jié)果偏高或重復(fù)性差。GLU放在CK和CK-MB的項目后面可能會使檢測結(jié)果偏高或重復(fù)性差，LDH放在ALT或者AST 的項目后面可能回使檢測結(jié)果偏高或重復(fù)性差。Mg放在ALP等含有鎂離子項目后面可能會使檢測結(jié)果偏高或重復(fù)性差。Ca放在a-amy項目后面可能會使檢測結(jié)果偏高或重復(fù)性差，Mg試劑（calmagite法）中含有EGTA，會干擾Ca的測試結(jié)果。另外我們發(fā)現(xiàn)相鄰兩個項目的PH值相差較大或反應(yīng)對PH要求嚴(yán)格的項目，也會對測定結(jié)果產(chǎn)生影響， TBA放在TP,ALB,UA,后邊測定，會使測定結(jié)果偏低等等。解決辦法：a、調(diào)整試驗(yàn)的前后順序來消除這種影響；b、在造成污染的項目和受污染的項目之間設(shè)置清洗并設(shè)定清洗的次數(shù)。 4 正確的參數(shù)設(shè)置也是用好檢驗(yàn)試劑的另一個關(guān)鍵因素 現(xiàn)代化分析儀上通常有分析程序供用戶設(shè)定，包括樣品量、試劑量、波長、分析方式和延遲時間、測試時間的設(shè)定等。下面我們就延遲時間和加樣程序的設(shè)定來說明正確使用分析參數(shù)對于正確運(yùn)用試劑的作用，比如肌酐苦味酸測定法，我們在設(shè)定延遲時間應(yīng)注意到苦味酸在堿性條件下50秒前首先快速與乙酰乙酸等快速反應(yīng)物質(zhì)產(chǎn)生紅色化合物，而在120秒后堿性苦味酸又能與慢反應(yīng)物質(zhì)產(chǎn)生陽性干擾，解決辦法：最好設(shè)定延遲時間為50-60秒之間。測定時間少于60秒，這樣就能充分消除了快反應(yīng)和慢反應(yīng)干擾，從而檢測到真正肌酐含量。 5 校準(zhǔn)液的正確使用 由于目前生產(chǎn)廠家提供的校準(zhǔn)液并非通用的，只使用于某一特定的分析系統(tǒng)。同一項目不同方法之間有很大差異，同一項目不同方法學(xué)的校準(zhǔn)液更不能混用，但是在臨床檢驗(yàn)中經(jīng)常會發(fā)生膽紅素釩酸鹽法用重氮法的校準(zhǔn)液校準(zhǔn)，乳酸脫氫酶L-P法用P-L法校準(zhǔn)液校準(zhǔn)，TBA循環(huán)酶法用比色法校準(zhǔn)液校準(zhǔn)等都會造成測定結(jié)果不準(zhǔn)確。另外同一法方學(xué)，不同廠家的校準(zhǔn)品和試劑都會有所差異，解決辦法：a、建議結(jié)合各實(shí)驗(yàn)室條件選擇適合自己實(shí)驗(yàn)室的校準(zhǔn)品，如果條件可進(jìn)行系統(tǒng)溯源；b、建立滿足同一方法學(xué)、同一測定條件、與理論計算的因子（FACTOR）值差異不大，沒有發(fā)現(xiàn)有明顯影響因素，方可進(jìn)行校正測定；c、建立一個可靠的參考系統(tǒng)作為校準(zhǔn)性基礎(chǔ)，然后將準(zhǔn)確性轉(zhuǎn)移到“使用方法”測定中去，使“使用方法”測定結(jié)果可溯源到參考系統(tǒng)所提供的準(zhǔn)確性基礎(chǔ)上來。在實(shí)現(xiàn)溯源性目標(biāo)過程中，永遠(yuǎn)以患者新鮮標(biāo)本為試驗(yàn)對象。以方法學(xué)對比試驗(yàn)方法為驗(yàn)證手段，采用回歸方程進(jìn)行統(tǒng)計分析，斜率接近1，截距較小，說明“使用方法”對標(biāo)本測定結(jié)果和溯源目標(biāo)參考系統(tǒng)對標(biāo)本檢測結(jié)果非常接近，檢測結(jié)構(gòu)可靠。 6 抗凝劑的使用 目前臨床上常用的抗凝劑有EDTA-K2、肝素、草氨酸鈉等，TBA和AFU不能使用肝素抗凝劑，因?yàn)楦嗡貢筎BA和AFU試劑發(fā)生混濁，導(dǎo)致吸光度假性偏高，從而使檢測結(jié)果偏高，解決辦法：a、認(rèn)真參閱試劑說明書b、作好與抽血人員之間的溝通和培訓(xùn)使抽血人員知道什么項目用何種標(biāo)本。 7 混成單一試劑的問題 比如酶法肌酐試劑，第一步R1中的酶要消除樣品中內(nèi)源性肌酸的干擾，如果混成單一試劑，則會使檢測結(jié)果偏高，消除法HDL、LDL也不能混成單一試劑，則會使測定的HDL和LDL不準(zhǔn)確。另外。有的試劑混成單一試劑后，穩(wěn)定性和抗干擾能力也會明顯下降。 解決辦法：a、在儀器通道或試劑位允許的情況下盡量使用雙試劑；b、如一定要使用單試劑，最好選擇試劑廠家針對部份項目專門生產(chǎn)好的單試劑 8 試劑瓶的問題 隨著全自動生化分析儀的普及，“開瓶穩(wěn)定性”也隨之受到了大家的重視，但是就目前有的試劑方法學(xué)來講，還達(dá)不到人們所要求的試劑開瓶后在儀器內(nèi)放很長時間不需要定標(biāo)，比如ALP、TP、GSP、等PH為堿性的試劑，開瓶后試劑會吸收空氣中的二氧化碳，使試劑本身的PH值下降，如果長時間開瓶不定標(biāo)或者校準(zhǔn)，會使檢測結(jié)果發(fā)生偏離，在國外有的項目有明文規(guī)定，必須72小時之內(nèi)定標(biāo)，比如BUN。但是在國內(nèi)的某些實(shí)驗(yàn)室為了方便，很長時間都不作校準(zhǔn)，導(dǎo)致測定結(jié)果的不準(zhǔn)確，解決辦法：a、了解試劑特性。及時對部份項目進(jìn)行校準(zhǔn)，對于每天標(biāo)本量不多的醫(yī)院，可按照1-2天的用量取用試劑放入儀器。 9 不同批號試劑想混的問題 目前將不同批號的試劑混合在一起使用的想象在檢驗(yàn)中經(jīng)常發(fā)生，當(dāng)然這一方面是為了節(jié)省成本，另一方面為了方便。但是不管是什么品牌、是什么試劑，由于不同批號的試劑生產(chǎn)時間不同，試劑中工具酶的活性會有差異，會發(fā)生水解的底物濃度隨時間長短也會不同。因此混在一起使用而又不定標(biāo)，可能會導(dǎo)致檢測結(jié)果的不準(zhǔn)確。還有如果有的試劑開瓶時間太長，空氣中的灰塵或細(xì)菌會進(jìn)入瓶內(nèi)，由于有的試劑含量有大量的蛋白質(zhì)和鹽，是細(xì)菌生產(chǎn)的最好條件。雖然有的試劑添加了防腐劑，單防腐劑的方法也有一定限度的，而且絕大多數(shù)廠家的試劑中是沒有加防腐劑的。 解決辦法：a、不同批號試劑建議不要混用，如果混用最好重新定標(biāo)。B、 試劑瓶在儀器內(nèi)使用時間不要過長，及時更換。C、一般每個試劑瓶內(nèi)由于試劑針不能吸完，或多或少都會留有幾毫升的試劑，如果是同一批號可以將未開瓶的同一批號試劑往里倒。但如果不是同一批號的試劑時到如后最好重新定標(biāo)，最好的做法是將每個批號的剩余試劑留起來待一定數(shù)量后混在一起，然后重新定標(biāo)后檢測 |
